之前遇到过一次最终灭菌工艺注射液注册申报过程中， CDE审评老师认为按照《化学药品注射剂灭菌和无菌工艺研究及验证指导原则（试行）》的如下要求：

灭菌工艺验证中使用的生物指示剂的接种量（初始芽孢数）不足，要求补充说明的案例。按照上述公式，灭菌温度121度，时间15分钟，则F0值要达到15，若D值为1，Nt取0，则LgN0要等于15，这种指示剂的接种量是很难找的，只能选取D值更大的，可能要接近2，这种D值的指示剂其实也不好找。

这个问题，看似有理有据，但是却总是觉得似乎哪里有问题。实际研究了一下发现：1. 121度，15分钟灭菌参数下期望的F0值其实并不是15，而是12，之所以使用15分钟，是额外加的保障，所以应该带入12计算，这样找D值大于1.5，且满足上面公式的生物指示剂就相对容易一些了，在进行灭菌工艺验证时，生物指示剂挑战试验，只去挑战12分钟，这样也就合理了。当然这家企业最终没有重新验证，而是通过专家论证生物指示剂在过度杀灭灭菌工艺中的意义解决了这个问题。

在一次CDE公开培训中， 我清楚的记得一位女老师，说过其实对于过度杀灭的灭菌工艺，CDE并不太注重生物指示剂的使用，甚至可以不用， 但没有在法规或指南中找到出处和依据。所以还是得用。