FDA的William Hallett博士曾在2016年的CHI年度会议上专题报告讲述了蛋白聚集体对免疫原性的影响¹。报告中提到：在生产过程、产品运输、储存和交付过程中，均可能导致蛋白聚体的形成。由于聚集体可能引起免疫原性，因此聚集体的含量控制是关键质量属性之一。

蛋白A亲和层析MaXtar ARPA：

添加剂助力聚集体去除蛋白A亲和层析被广泛用于抗体纯化的捕获步骤。由于蛋白A通过Fc区特异性结合抗体，这一步可以显著减少过程相关杂质，包括宿主细胞蛋白和核酸。然而，在典型条件下，蛋白A色谱法去除聚集体的效果较差，已知聚集体比单体结合更强，单独调节洗脱pH通常不足以实现良好的分离。因此，在许多情况下，聚集体的去除往往依靠后续离子交换层析或多模式层析，案例分别介绍：洗涤和洗脱缓冲液中加入氯化钙/聚乙二醇(PEG)或氯化钠/聚乙二醇(PEG)组合，可以显著提高蛋白质A的聚集体去除能力，盐和PEG的协同作用促进单体与聚集体有效分离。

样品信息：澄清后培养液

平衡Buffer:50 mM Tris-HAc, 150 mM NaCl, pH 7.4

洗涤Buffer:50 mM NaAc-HAc, 500 mM CaCl₂, 5% PEG, pH 5.5;

Or 50 mM NaAc-HAc, 750 mM NaCl, 5% PEG, pH 5.5

洗脱Buffer:50 mM HAc, 500 mM CaCl₂, 5% PEG, pH 3.1; Or 50 mM HAc, 750 mM NaCl, 5% PEG, pH 3.1

图1： 添加500mM CaCl₂和5%PEG的蛋白A纯化图谱

图2： 未优化和优化方案下蛋白A层析叠加图

小结图1和图2²可见，洗涤和洗脱缓冲液中加入500mM CaCl₂和5%PEG，或者750 mM氯化钠和5% PEG显著提高单体-聚集体的分离，SEC纯度有明显提高。