2022年5月27日，USP美国药典委员会召开了“人用药中亚硝胺及基因毒性杂质控制“网络研讨会，会议召集中、美、欧、日、印等全球各监管机构和业界专家分享观点。在听取本次研讨会的各位专家的分享的过程中，对我自己在亚硝胺问题上的一些疑问得到了一些解答，现将我的一些疑问以及专家解答及我个人理解总结如下：

 一、官方是否接受AMES试验测试作为单一的排除亚硝胺风险的方法？

Teva公司杂质专家Raphael Nudelamn博士，指出现在机构不接受AMES测试作为单一的排除亚硝胺风险的方法，也就是说如果AMES结果是阴性的还不足够，还需要进行后续体内的试验来证明是阴性的。

如果Ames是阳性的，还可以使用体内的致突变性的研究来获得进一步的结果。首先要进行暴露试验来确认器官中有出现相应的暴露量，在进行暴露研究后，如果确认没有暴露的话，就没有毒理性的风险，因为没有任何的相关器官的暴露，但是如果在血浆或者肝脏中有相应的暴露的话，就必须进行体内的致突变的研究。如果TGR结果是阴性的，就可以说明之前体外的结果是不具有相关性的，该亚硝胺可以按照第5类杂质来控制，可以按照ICHQ3A/B来控制。如果是阳性的，就需要进一步的研究来应用适当的剂量来计算基准下限。根据BMDL10来线性外推。但是仍不确定上述方法是否可以获得的监管机构的批准，目前为止还未就某种方法获得监管机构的意见。

 现场问答中该专家也再次确认AMES阴性不足以排除亚硝胺风险，即使方案设计的很充分。监管机构对亚硝胺的态度超越了ICH M7的要求的，FDA不会单纯的以ICH M7的结论来作为参考依据。

 Aloka Srinivasana博士，RAAHA公司负责人，FDA仿制药办公司前任官员也指出，FDA目前还不接受使用Ames试验来得出任何关于NDSRI (原料药相关亚硝胺杂质)的结论。

二、除了官方给出了AI值的亚硝胺杂质，其他亚硝盐杂质，比如NDSRI (原料药相关亚硝胺杂质)的限度怎么设定？

答：新的亚硝胺杂质限度设置的方法：

1.  如果该亚硝胺杂质有充分的动物致癌数据，可以按照ICH M7指南中的建议使用TD50外推得到该杂质寿命暴露下的特定限度。

2.  如果该亚硝胺杂质没有充分的动物致癌数据，那么有两种方式可以设定改亚硝胺杂质额度限度：

     A．使用亚硝胺类别特定TTC，即18ng/天（从Lhasa致癌性数据库外推得到）作为默认的限度。

     B.  使用基于SAR(构效关系)使用read-across方法来外推得到限度。

但是Raphael Nudelamn博士也指出通过使用交叉参照法（read-across approach）很难从小分子亚硝胺的AI值获得复杂亚硝胺杂质（也就是NDSRI）的限度。并给出了一个使用通过摩尔量的转换获得复杂亚硝胺杂质的限度也是一种方法，即用亚硝胺结构相似的小分子亚硝胺杂质的AI通过摩尔量换算得到大分子量的杂质的AI值。

但Aloka Srinivasana博士，RAAHA公司负责人，FDA仿制药办公司前任官员指出，FDA接受通过real-cross方法用替代物来预测安全性并设立限度。对于通过分子量调整的计算限度的方法，FDA的态度很模糊，EMA和health拒绝了该方法。FDA也不接受AMES阴性的结果来作为其审评的基础。

另外，Raphael Nudelamn博士引用了EMA Articale 5 (3) 中的一段话“It is therefore prudent to consider all N-nitrosamines containing a α-hydrogen that can be metabolically activated as potentially mutagenic and carcinogenic to humans, however with different potencies depending on nature of the functional group, specifics of metabolic activation and repair efficiency and capacity.” Raphael Nudelamn博士认为可以由此得出结论，在α碳上没有氢原子的亚硝胺不属于关注队列的亚硝胺。但这个justification是否可以被官方接受，还需要在实操中进行证实。

Teva公司杂质专家Raphael Nudelamn博士演讲视频-setting limits for complex nitrosamines请参见https://www.canva.com/design/DAFC13bYDC8/alyxpopyCA3NI96GQsxhkA/watch?utm_content=DAFC13bYDC8&utm_campaign=designshare&utm_medium=link&utm_source=publishsharelink